纖維素酶活力的測定

  纖維素酶是一種多組分酶，包括C1 酶、CX 酶和¦Â-葡萄糖苷酶三種主要組分。其中C1酶的作用是將天然纖維素水解成無定形纖維素，CX 酶的作用是將無定形纖維素繼續水解成纖維寡糖，Â-葡萄糖苷酶的作用是將纖維寡糖水解成葡萄糖。纖維素酶水解纖維素產生的纖維二糖、葡萄糖等還原糖能將堿性條件下的3,5-二硝基水楊酸（DNS）還原，生成棕紅色的氨基化合物，在540nm 波長處有zui大光吸收，在一定范圍內還原糖的量與反應液的顏色強度呈比例關系，利用比色法測定其還原糖生成的量就可測定纖維素酶的活力。
1．實驗材料
（1）纖維素酶制劑 500mg
（2）濾紙 50mg / 份 × 4
（3）脫脂棉花 50mg / 份 × 4
（4）羧甲基纖維素鈉（CMC） 510mg
（5）水楊酸苷 500mg
2．主要儀器
（1）可見分光光度計
（2）恒溫水浴槽
（3）水浴鍋
（4）箱式電阻爐
（5）剪刀
（6）萬分之一分析天平
（7）恒溫干燥箱
（8）冰箱
（9）試管架
（10）膠頭滴管
（11）具塞刻度試管 20mL×24
（12）移液管或加液器 0.5 mL×3；2mL×7
（13）容量瓶 100 mL×6；1000 mL×3
（14）量筒 50 mL×2；100 mL×1；500 mL×1
（15）燒杯 100 mL×6；500mL×3；1 000 mL×1
3．試劑（均為分析純）
（1）濃度為1mg/mL 的葡萄糖標準液
將葡萄糖在恒溫干燥箱中105℃下干燥至恒重，準確稱取100mg 于100mL 小燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，移入100mL 容量瓶中用蒸餾水定容至100mL，充分混勻。4℃冰箱中保存（可用12～15 天）。
（2）3,5-二硝基水楊酸（DNS）溶液
準確稱取DNS 6.3g 于500mL 大燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，加入2mol/L NaOH 溶液262mL，再加到500mL 含有185g 酒石酸鉀鈉（C4H4O6KNa · 4H2O，MW=282.22）的熱水溶液中，再加5g結晶酚（C6H5OH，MW=94.11）和5g無水亞硫酸鈉（Na2SO3，MW=126.04），攪拌溶解，冷卻后移入1 000mL 容量瓶中用蒸餾水定容至1 000mL，充分混勻。貯于棕色瓶中，室溫放置一周后使用。
（3）0.05 mol/L pH4.5 的檸檬酸緩沖液A 液（0.1 mol/L 檸檬酸溶液）：準確稱取C6H8O7 · H2O（MW=210.14）21.014g 于500mL大燒杯中，用少量蒸餾水溶解后，移入1 000mL 容量瓶中用蒸餾水定容至1 000mL，充分混勻。4℃冰箱中保存備用。