肥料中糞大腸菌群的測定

         1　范圍
    本標準規定了肥料中糞大腸菌群的測定方法。

         2　定義
    糞大腸菌群  fecal coliforms系指一群在隔水式恒溫培養箱44.5℃±0.5℃條件能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。糞大腸菌群數為每克（毫升）肥料樣品中糞大腸菌群的MAX可能數（MPN）。

         3　設備和材料
    •　高壓蒸汽滅菌器。
    •　顯微鏡。
    •　恒溫水浴或隔水式培養箱。
    •　恒溫旋轉式搖床。
    •　鼓風干燥箱。
    •　天平。
    •　酸度計或精密pH 試紙。
    •　接種環。
    •　試管（15mm×150mm）。
    •　小套管（杜蘭管）。
    •　移液管。
    •　三角瓶。
    •　培養皿。
    •　載玻片。
    •　玻璃珠。
    •　酒精燈。
    •　試管架。

         4　培養基和試劑
         4.1　培養基：遵照附錄A的規定。
         4.2　革蘭氏染色液：遵照附錄B的規定。

         5　檢驗步驟
         5.1　樣品稀釋
    在無菌操作下稱取樣品10.0g或吸取樣品10mL，加入到帶玻璃珠的90 mL無菌水中，置于搖床上200 r/min充分振蕩30min，即成10-1稀釋液。
    用無菌移液管吸取5.0 mL上述稀釋液加入到45 mL無菌水中，混勻成10-2稀釋液。這樣依次稀釋，分別得到10-3，10-4等濃度稀釋液（每個稀釋度須更換無菌移液管）。

         5.2　乳糖發酵試驗
    選取三個連續適宜稀釋液，分別吸取不同稀釋液1.0mL加入到乳糖膽鹽發酵管內，每一稀釋度接種3支發酵管，置44.5℃±0.5℃恒溫水浴或隔水式培養箱內，培養24h±2h。如果所有乳糖膽鹽發酵管都不產酸不產氣，則為糞大腸菌群陰性；如果有產酸產氣或只產酸的發酵管，則按5.3進行。

         5.3　分離培養
從產酸產氣或只產酸的發酵管中分別挑取發酵液在伊紅美藍瓊脂平板上劃線，置36℃±1℃條件下培養18h～24h。

         5.4　證實試驗
         從5.3分離平板上挑取可疑菌落，進行革蘭氏染色。染色反應陽性者為糞大腸菌群陰性；如果為革蘭氏陰性無芽胞桿菌則挑取同樣菌落接種在乳糖發酵管中，置44.5℃±0.5℃條件下培養24h ±2h。觀察產氣情況，不產氣為糞大腸菌群陰性；產氣為糞大腸菌群陽性。

         5.5　結果
         證實實驗為糞大腸菌群陽性的，根據糞大腸菌群陽性發酵管數，查MPN檢索表，得出每克（毫升）肥料樣品中的糞大腸菌群數。