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      細胞株說明書、細胞增殖與細胞生長

      更新時間:2019-05-27  |  點擊率:1508

       

              一、細胞株說明書

              細胞株或細胞系在引進時,需要查閱正規(guī)的培養(yǎng)物保藏中心的有關(guān)細胞株系的編號或產(chǎn)品號。如惡性黑色素瘤A375細胞株,在ATCC(TheAmericanTypeCultureCollection,美國典型培養(yǎng)物保藏中心)的保藏號為CRL-1619。

              從各地保藏中心購買引進的細胞株都應(yīng)該配套有對應(yīng)的細胞株說明書,內(nèi)容包括細胞株的寄存者(MAX初建立株系的負責人)、培養(yǎng)時所用培養(yǎng)基和血清的要求、是否貼壁生長或懸浮生長、建株來源組織細胞種類、繁殖條件(培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基種類、血清添加量、其他添加物、CO2濃度、培養(yǎng)溫度等)、傳代要求(傳代時機、傳代比例等)、凍存條件(凍存液組方、凍存溫度)等。在引進前要充分了解該細胞株的說明書內(nèi)容,尤其要熟知細胞株的繁殖條件、傳代要求和凍存條件等事項。

       

              二、細胞增殖

              典型培養(yǎng)條件下的動物細胞、人類細胞,會正常進行細胞分裂,日漸增加細胞數(shù)量。可增殖細胞是細胞具有良好活性的特征。

              增殖也是細胞固有的屬性之一,不同細胞株的增殖周期不同,多數(shù)培養(yǎng)細胞的增殖周期或細胞周期是20-24h。

              哺乳動物細胞的分裂是二分裂,如果是20-24h分裂一次,那么細胞生長克隆的細胞數(shù)與培養(yǎng)天數(shù)(n)的關(guān)系可以表達為2n-1,如此,第1、2、3、4天的細胞個數(shù)分別為1、2、4、8、16。對于靜態(tài)懸浮細胞培養(yǎng),依據(jù)此關(guān)系,通過鏡檢獨立的細胞克隆,計數(shù)平均每個獨立細胞克隆的細胞個數(shù),則非常容易知道是哪天進行的接種培養(yǎng)。

       

              三、細胞生長曲線

              (一)概述

              在營養(yǎng)物質(zhì)一定的體外培養(yǎng)體系中,無菌培養(yǎng)條件下,動物細胞的生長狀況和生長速度與接入的細胞密度有關(guān)系。描述細胞生長的連續(xù)變化中細胞密度與培養(yǎng)時間的關(guān)系,往往用細胞生長曲線表示,包括遲緩期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰退期。正確的生長曲線描述,依賴正常的培養(yǎng)條件和無菌操作,并且需要熟練的細胞計數(shù)操作。細胞生長曲線是以細胞密度為縱坐標、累計培養(yǎng)時間為橫坐標作圖描繪的折線圖,也可以直接以細胞密度作縱坐標、累計培養(yǎng)時間為橫坐標在半對數(shù)表上作圖描繪的折線圖。若每隔24h測定細胞密度,可用天(d)作累計培養(yǎng)時間單位,若隔12h或更短時間測定細胞密度,建議使用小時(h)作累計培養(yǎng)時間單位。

              作為細胞生長曲線觀察用的培養(yǎng)物,在后續(xù)培養(yǎng)過程中,不得改變培養(yǎng)體系即培養(yǎng)液的體積,要確保培養(yǎng)條件的穩(wěn)定。需要換液時采用定量換液方法操作,使用同樣體積的新鮮培養(yǎng)液替代廢棄培養(yǎng)液,不干擾細胞團,不取出細胞。培養(yǎng)條件包括溫度、CO2濃度、趨飽和濕度,一般要求二氧化碳培養(yǎng)箱37℃、5%CO2濃度、相對濕度90%以上的條件下進行哺乳動物細胞培養(yǎng)。

             (二)生長曲線對于哺乳動物細胞培養(yǎng)的意義

              典型的生長曲線包括遲緩期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰退期這4個時期。生長曲線也是細胞株具有的*屬性,不同細胞株的生長曲線圖形不*一致。

              日常培養(yǎng)的細胞株用于某種目的前,建議預(yù)先培養(yǎng)以便觀察其細胞生長曲線,了解該細胞株的合理接種密度。

              (1)當接種細胞密度足夠高時,將不出現(xiàn)典型的遲緩期或遲緩期很短,并且到達衰退期的累計培養(yǎng)時間MAX短。進行細胞藥理或細胞毒理試驗時,預(yù)培養(yǎng)的細胞接種密度往往控制在1×105-2×105/ml范圍,以便在加載供試藥物時,所培養(yǎng)的細胞處于對數(shù)生長期并已形成單層或接近單層。

              (2)當接種細胞密度合理時,會出現(xiàn)典型的遲緩期,并且到達衰退期的累計培養(yǎng)時間比較短。正因為如此,進行傳代培養(yǎng)、原代培養(yǎng)、擴大培養(yǎng)時,一般細胞培養(yǎng)時都要控制接種密度在2×104-5×105/ml范圍。

              (3)當接種細胞密度太低時,會出現(xiàn)很長的遲緩期,很難觀察到對數(shù)生長期、穩(wěn)定期和衰退期,要觀察到衰退期的累計培養(yǎng)時間非常長。在依賴哺乳動物細胞培養(yǎng)進行生物制品生產(chǎn)的過程中,尤其需要避免此種細胞密度下的接種培養(yǎng),以免造成不必要的經(jīng)濟損失和時間浪費。

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