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      蠟樣芽胞桿菌的確證實(shí)驗(yàn)

      更新時間:2019-05-31  |  點(diǎn)擊率:1151

      ⒈染色鏡檢

              挑取純培養(yǎng)的單個菌落,革蘭氏染色鏡檢。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性芽胞桿菌,大小為(1μm~1.3μm)×(3μm~5μm),芽胞呈橢圓形位于菌體中央或偏端,不膨大于菌體,菌體兩端較平整,多呈短鏈或長鏈狀排列。

      ⒉生化鑒定

              挑取純培養(yǎng)的單個菌落,進(jìn)行過氧化氫酶試驗(yàn)、動力試驗(yàn)、硝酸鹽還原試驗(yàn)、酪蛋白分解試驗(yàn)、溶菌酶耐性試驗(yàn)、V-P 試驗(yàn)、葡萄糖利用(厭氧)試驗(yàn)、根狀生長試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)。

      ⒊溶血試驗(yàn)

              挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落接種于TSSB 瓊脂平板上,電熱恒溫培養(yǎng)箱30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24h±2 h。蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色,不透明,似白色毛玻璃狀,有草綠色溶血環(huán)或*溶血環(huán)。蘇云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現(xiàn)弱的溶血現(xiàn)象,而多數(shù)炭疽芽胞桿菌為不溶血,巨大芽胞桿菌為不溶血。

      ⒋根狀生長試驗(yàn)

              挑取單個可疑菌落按間隔0.5cm 左右距離劃平行直線于營養(yǎng)瓊脂平板上,

              30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長的特征。蠟樣芽胞桿菌菌株不具形成根狀生長的特征。

      ⒌蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗(yàn)

              取經(jīng)電熱恒溫培養(yǎng)箱30 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h±2 h 并于室溫放置3 d~4 d 的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物少許于載玻片上,滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥,微火固定后,加甲醇作用30 s 后傾去,再通過火焰干燥,于載玻片上滴滿0.5%堿性復(fù)紅,放火焰上加熱(微見蒸氣,勿使染液沸騰)持續(xù)1 min~2 min,移去火焰,再更換染色液再次加溫染色30 s,傾去染液用潔凈自來水*清洗、晾干后鏡檢。觀察有無游離芽胞(淺紅色)和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結(jié)晶體。如發(fā)現(xiàn)游離芽胞形成的不豐富,應(yīng)再將培養(yǎng)物置室溫2 d~3 d 后進(jìn)行檢查。除蘇云金芽胞桿菌外其它芽胞桿菌不產(chǎn)生蛋白結(jié)晶體。

      ⒍溶菌酶耐性試驗(yàn)

              用接種環(huán)取純菌懸液一環(huán),接種于溶菌酶肉湯中,36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h。蠟樣芽胞桿菌在本培養(yǎng)基(含0.001 %溶菌酶)中能生長。如出現(xiàn)陰性反應(yīng),應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)24 h。巨大芽胞桿菌不生長。

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