用電熱恒溫培養箱做小鼠大腦皮層神經元原代細胞培養

  電熱恒溫培養箱常用于各種細菌細胞培養實驗，那小鼠大腦皮層神經元原代細胞是如何培養的的呢？由小喆帶大家了解一下。

  小鼠大腦皮層神經元原代培養步驟：
  1、于無菌條件下切取鼠頭并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠腦；
  2、預冷解剖液中分離去除軟膜、血管、取大腦皮質漂洗，用眼科剪將皮質反復剪切成碎塊；
  3、移入培養皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，電熱恒溫培養箱中37℃消化30min；
  4、將皮層組織碎塊移入離心管，棄去剩余消化液，用接種液洗3次，每次洗滌后使組織塊充分沉降到試管底，棄去上清液；
  5、最后再用接種液1ml混懸，反復吹打（巴氏吸管）混懸液中組織塊，力度適中，至渾濁后將上清液移入培養瓶待用；
  6、加入1ml接種液后再次吹打，如此反復3-4次，組織塊逐漸消化后，棄去最終殘塊；
  7、收集含單細胞懸液的上清液約4-5ml于培養瓶中，以接種液重新懸浮細胞，細胞記數；接種1x107個細胞于6孔培養板中；
  8、培養24h至細胞貼壁后，換全培養液（DMEM/F12+2%B27，engreen）培養3d，觀察神經元生長狀況；
  9、換用阿糖胞苷培養液(終濃度2.5ug/ml，換半液)培養3d以抑制神經膠質細胞及雜細胞生長，獲得單純培養的原代神經細胞；
  10、每隔3d換全培養液1次，每次換半液。

     以上是小喆簡單的見解，關注上海喆圖公眾號，了解更多小知識。