師姐收藏的細胞培養小技巧

1. 不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染；迅速擴增凍存，凍存細胞復蘇后第二天最好更換一次培養基。

2. 發現細胞有污染迅速處理掉，特別是當你養了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發現，支原體污染的話，細胞會長的慢，可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。

3. 不同細胞生長周期不同。有的生長很快，比如說 MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了。有的又是特別慢，比如 BT474，傳代是一分二，復蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養細胞的過程中多多摸索。

4. 對于嬌弱的細胞，就得細心呵護。胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉速和時間。每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住，是每天。

操作方面

1. 最好不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套。自己的東西自己包自己烘干。槍頭什么的只要有可能污染就換。

2. 嚴格無菌操作。操作臺一定要擺個酒精燈，所有操作緊密圍繞在酒精燈周圍進行。離開過操作臺的東西再進操作臺之前一定要用酒精消毒一遍，稍微烤一下，別直接放到火上，離一段距離。包括一切實驗耗材、儀器、以及你帶著手套的手。

3. 水浴鍋很臟，生化培養箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，記得要勤換。身體的各個部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實驗臺，又比如培養箱內部。培養箱隔一段時間用酒精棉擦洗一次。

4. 細胞房日常的值日清潔是必須的，此外還要定期熏蒸。晚上離開的時候最好給細胞房照紫外，超凈臺是用完就開。最好是同一時間就你一個人在細胞房養細胞。

5. 動作要既輕柔又有力。動作太重會有一堆一堆的氣泡，動作太輕就吹不下來。剛開始的時候吹細胞太痛苦了，稍微一下就起泡。后來就是吹的時候槍里的培養基不要一次全都壓出來，留一點，槍的最頭部盡量深的在液面以下。